PDX模型(Patient-Derived Tumor Xenograft)通过将患者肿瘤组织移植至免疫缺陷小鼠体内，构建出高度保留原发肿瘤异质性和生物学特性的移植瘤模型。其制作流程可分为样本获取与预处理、小鼠准备与移植、移植瘤监测与传代三大核心阶段，具体操作如下：
一、样本获取与预处理
样本来源
手术切除的肿瘤组织、活检样本或恶性胸腹水沉淀物。
优先选择新鲜样本(离体时间≤2小时)，避免冻存后成瘤率下降；化疗后样本因细胞活性降低，移植成功率显著降低。
预处理操作
清洗与剔除：将组织置于含双抗的PBS缓冲液中，剔除坏死组织和正常组织，减少非肿瘤细胞干扰。
组织分块：
预留样本：取部分组织(150-300mm³)置于福尔马林中固定(用于病理分析)或液氮冻存(作为备份)。
移植用组织：剩余组织剪成20-30mm³小块(异位移植)或<1mm³微块(原位移植，如肾包膜下接种)。
基质胶包裹：原位移植前，将微块用基质胶包裹以增强黏附性，提高成瘤率。
二、小鼠准备与移植
小鼠品系选择
重度免疫缺陷小鼠：如NOD/SCID、NSG(NOD-scid-Il2rgnull)或NCG(NOD/ShiltJGpt-Prkdcem26Cd52Il2rgem26Cd22/Gpt)小鼠，因缺乏T、B、NK细胞，移植成功率更高。
血液瘤模型：需全身辐照进一步抑制免疫系统，防止排斥反应。
移植方式
异位移植(皮下接种)：
操作：将组织块用套针接种至小鼠腋下背部或后腿部皮下，每只小鼠可接种2-4个部位。
优势：操作简单，便于观察肿瘤生长；血供丰富区域(如腋窝)成瘤率更高。
原位移植：
肾包膜下接种(SRC)：
麻醉小鼠后，在肋脊角靠下位置备皮、消毒。
切开皮肤，分离皮下和侧腹膜，暴露肾脏。
用镊子戳开肾被膜，将2-3块微块肿瘤组织送入肾被膜下。
缝合腹膜、皮下组织和皮肤，消毒后放回饲养笼。
优势：模拟原发肿瘤微环境，成瘤率更高(尤其适用于肝癌等实体瘤)。
血液瘤移植：
尾静脉注射：将患者骨髓或外周血分离的肿瘤细胞经尾静脉注入，模拟全身扩散。
肝内注射：直接注入肝脏，缩短成瘤周期，但手术技术要求高。
三、移植瘤监测与传代
生长监测
定期观察：每日检查小鼠健康状态，记录肿瘤出现时间。
体积测量：肿瘤生长至5mm×5mm时，用游标卡尺测量长径(L)和短径(W)，按公式
V=21×L×W2 计算体积。
成瘤标准：体表瘤生长至800-1000mm³时处死小鼠，取瘤组织标记为F1代；无可见成瘤动物观察4-6个月，未成瘤视为失败。
传代培养
F1代处理：取F1代肿瘤组织，重复上述移植步骤，构建F2代，依此类推。
样本保存：每代移植瘤均需冻存部分组织(液氮或-80℃)，保留基因组DNA、RNA和蛋白样本，以备后续分析。
质量控制：通过病理学分析、基因表达检测等验证传代瘤与原发肿瘤的一致性。
四、关键影响因素与优化策略
成瘤率提升
组织大小：适中体积(20-30mm³)平衡细胞数量与营养供应，避免过大导致中心坏死。
移植部位：肾包膜下因血供丰富，成瘤率显著高于皮下。
小鼠品系：NSG小鼠因免疫缺陷更彻底，成瘤率优于NOD/SCID小鼠。
操作规范
无菌环境：所有操作在SPF动物房超净台内完成，防止感染导致小鼠死亡。
麻醉与镇痛：原位移植需严格麻醉小鼠，术后注射镇痛剂减少应激。
快速处理：样本离体后尽快处理，避免细胞活性下降。
五、应用与局限性
应用：PDX模型广泛用于药物筛选(临床相关性达87%-90%)、个性化治疗预测及肿瘤机制研究。
局限性：构建周期长(4-6个月)、成本高，且部分癌种(如皮肤T细胞淋巴瘤)早期阶段难以成瘤。
更新时间：2025-08-08
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